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本试剂盒采用SABC-Cy3荧光显色和SABC-POD酶促显色双显色原理，适用于一抗类型为大鼠IgG的免疫组化检测。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量60000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。等电点接近中性，这些特点使链霉亲和素的非特异吸附很低。因该方法的中心是StreptAvidin-Biotin-enzyme Complex，故命名为SABC。SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。SABC-Cy3代表了新一代的免疫荧光方法。Cy3比传统上的荧光更具有亲水性，因而不会因疏水性而引起非特异性吸附或聚合，从而背景更低。而且其敏感性和稳定性都更好。Cy3在554nm激化，在568～574nm发射荧光，呈鲜红色。免疫组化双显色试剂盒采用CY3+过氧化物酶POD标记的链酶亲和素（SABC-Cy3+POD），用户根据实验需要，可在同一张切片上用两套显示系统观察。

本试剂盒中各组分试剂为浓缩型，需稀释后使用，另有四个滴瓶供稀释试剂用。

• 粘片剂APES（ZN1946）或POLY-L-LYSINE（ZN1945）。
  
• EDTA修复液（ZN1951）。
  
• 0.02M PBS（pH7.2～7.6）配法（ZN2950）：1000mL蒸馏水中加9克氯化钠，7克Na₂HPO₄·12H₂O，0.5克NaH₂PO₄·2H₂O。
  
• 0.01M枸橼酸盐缓冲液（ZN1955）：1000mL蒸馏水中加3克枸橼酸三钠（C₆H₅Na₃O₇·2H₂O），0.4克枸橼酸(C₆H₈O₇·H₂O)。
  
• DAB显色试剂盒（ZN2968）。

• 石蜡片热修复染色步骤：
  
  • 石蜡切片，常规脱蜡至水。
    
  • 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
    
  • 热修复抗原：将切片浸入到EDTA修复液中，微波炉加热到沸腾后断电，间隔5～10min再修复1～2次，冷却。
    
  • 滴加用稀释后的正常山羊血清封闭液(稀释比1:10)，37℃孵育30min，甩干，勿洗。
    
  • 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加生物素化兔抗大鼠IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加SABC-Cy3(参考效价1:100)或SABC-POD(参考效价1:100)，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 水溶性封片剂封片。
    
  • 荧光显微镜观察。
• 石蜡片酶消化染色步骤：
  将A程序的第4步：滴加酶消化液室温5～10min。酶修复可选用复合修复液(ZN1952)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)消化组织。蒸馏水洗2min×3次。
  
• 石蜡切片酶不消化/修复程序：
  对于不需要微波修复或消化的抗原，省略A程序中的第4步即可。
  
• 细胞片的染色步骤：
  
  • 爬片。圆形盖破片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine），灭菌，备用。贴壁细胞消化后加入放有盖玻片的24孔板中培养1～2天，使细胞贴壁。悬浮细胞则处理后直接涂片，使细胞贴附。
    
  • 固定。4℃预冷4%多聚甲醛固定20min或冷丙酮固定10min。蒸馏水洗2min×3次。
    
  • 3% H2O2去离子水室温孵育5～10min，以消除内源性过氧化物酶活性。PBS(ZN2950)冲洗，5min×3次。
    
  • 打孔。0.25% Triton X-100处理细胞15min。（若采用丙酮固定则此步骤可省略）
    
  • 酶消化处理室温5～10min。酶消化可选用复合修复液(ZN1952)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)。蒸馏水洗2min×3次。
    
  • 滴加用稀释后的正常山羊血清封闭液(稀释比1:10)，37℃孵育30min，甩干，勿洗。
    
  • 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加生物素化兔抗大鼠IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加SABC-Cy3(参考效价1:100)或SABC-POD(参考效价1:100)，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 水溶性封片剂封片。
    
  • 荧光显微镜观察。